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ELISA試劑盒檢測血清的詳細留意事項

更新時間:2023-05-19      瀏覽次數:440

ELISA試劑盒檢測血清的詳細留意事項
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??ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。
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??在檢測時,受檢標本(測定其中的抗原)與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體,通過反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
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??1. 要留意防止呈現(xiàn)嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因而,在以HRP為符號酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反應顯色。
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??2. 冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發(fā)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果,然后引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應留意,不要進行劇烈振蕩,重復倒置混勻即可。
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??3. 標本在保存中如呈現(xiàn)細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時,應離心沉積后取上清檢測。
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??4. 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染,一則細菌的成長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。
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??5. 血清標本如是以無菌操作別離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長期保存,應在-70℃以下。

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