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PCR檢測(cè)試劑盒樣本如何處理

更新時(shí)間:2024-07-16      瀏覽次數(shù):827

PCR檢測(cè)試劑盒的樣本處理涉及幾個(gè)關(guān)鍵步驟,具體取決于所使用的試劑盒類型和待檢測(cè)的樣本。以下是一些典型的步驟和注意事項(xiàng):


樣本處理(樣本處理區(qū))過程:

1、先對(duì)痰液樣本進(jìn)行目測(cè),若樣本中唾液占大部分,則需重新采集樣本

2、目測(cè)合格后,在樣本中加入2~3倍體積4%的NaOH溶液,<采希?50rpm、37℃條件下處理30min或常溫下1Hr,使其充分液化(無(wú)明顯固狀物并且吸出時(shí)無(wú)拖絲現(xiàn)象即為液化*;若液化不*,可適當(dāng)再加入少量4%的NaOH溶液直至液化*)。

3、取液化后的樣本900ul以及試劑盒中的陰性對(duì)照、強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照和臨陽(yáng)性對(duì)照各500ul于1.5ml無(wú)菌離心管中,13,000rpm離心10min。

4、棄上清(先倒出大部分液體,再用移液器盡量吸干至無(wú)明顯液滴為止),沉淀中加入1ml滅菌生理鹽水,大豆RR PCR檢測(cè)試劑盒振蕩懸浮(注意:按緊離心管蓋后,橫向按在旋渦振蕩器上將沉淀振起),13,000rpm離心10min。

5、棄上清,用1ml滅菌生理鹽水洗滌沉淀,13,000rpm離心10min。

6、棄上清,向沉淀中加入DNA提取液30ul,振蕩混勻,2,000rpm離心5sec,放37℃溫浴30min,再放入100℃水浴/干浴10min,13,000rpm離心10min,保留上清備用。(如果樣本裂解產(chǎn)物當(dāng)天不使用,請(qǐng)于-20℃保存。)


支原體PCR檢測(cè):這種試劑盒用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物和其他生物基質(zhì)中的支原體。樣本預(yù)處理包括從細(xì)胞培養(yǎng)液中取100µl上清至1.5 ml反應(yīng)管中,然后在95℃下孵育10分鐘,接著以最大轉(zhuǎn)速離心15秒。之后,可以直接使用2µl進(jìn)行PCR,或者在特定溫度下保存樣本長(zhǎng)達(dá)6天1。


血液樣本的直接PCR:這種試劑盒允許直接對(duì)全血樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,無(wú)需進(jìn)行DNA純化或樣本預(yù)處理。它兼容含EDTA、肝素、檸檬酸鹽等常規(guī)抗凝劑的新鮮血液、冷藏(凍)血液及商用干xue漬。試劑盒中的DNA Polymerase組合具有高保真性和對(duì)PCR抑制劑的高耐受性2。


熒光定量PCR:熒光定量PCR(Real-time PCR)是一種在標(biāo)準(zhǔn)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的方法,用于定量樣本中的DNA或RNA。它通過在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增反應(yīng)中每個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè),從而進(jìn)行定量分析3。


RT-PCR方法檢測(cè)xin冠病毒:在RT-PCR檢測(cè)中,通常包括RNA提取、RT反應(yīng)和PCR反應(yīng)三個(gè)環(huán)節(jié)。質(zhì)控品的使用對(duì)于試劑盒生產(chǎn)過程中的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制至關(guān)重要。例如,模擬病毒質(zhì)控品可用于樣本采集、保存、轉(zhuǎn)運(yùn)和RNA提取及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作等過程的質(zhì)量控制4。


這些步驟展示了PCR檢測(cè)試劑盒樣本處理的多樣性和復(fù)雜性。具體操作需要根據(jù)試劑盒說(shuō)明書和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行。



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