小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多，但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng)，  或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。
小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)物的生理環(huán)境不同時(shí)定義為其物理化學(xué)環(huán)境中，更好地理解血清的組件，所必需的增殖的生長(zhǎng)因子的鑒定，并更好地理解細(xì)胞在培養(yǎng)的微環(huán)境（即，細(xì)胞 - 細(xì)胞相互作用，氣體的擴(kuò)散，與基質(zhì)相互作用）現(xiàn)在允許在無血清培養(yǎng)基中某些細(xì)胞系的培養(yǎng)。
小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)物的主要優(yōu)點(diǎn)是操縱物理化學(xué)（即，溫度，pH，滲透壓，O2和CO2張力）和生理環(huán)境（即，激素和營(yíng)養(yǎng)物濃度），其中所述細(xì)胞繁殖的能力。除溫度，將培養(yǎng)環(huán)境是由生長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行控制。
小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞對(duì)于培養(yǎng)，只要我們細(xì)心操作，注意細(xì)節(jié)，并不是大家說的那樣困難。對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)和有條件的客戶，建議由公司代為培養(yǎng)細(xì)胞及進(jìn)行后續(xù)研究。

細(xì)胞概述

細(xì)胞(英文名: cell) 并沒有統(tǒng)一的定義，比較普遍的提法是:細(xì)胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細(xì)胞所組成，但病毒生命活動(dòng)也必須在細(xì)胞中才能體現(xiàn)。一般來說， 細(xì)菌等絕大部分微生物以及原生動(dòng)物由一個(gè)細(xì)胞組成，即單細(xì)胞生物，高等植物與高等動(dòng)物則是多細(xì)胞生物。細(xì)胞可分為原核細(xì)胞、真核細(xì)胞兩類，但也有人提出應(yīng)分為三類，即把原屬于原核細(xì)胞的古核細(xì)胞獨(dú)立出來作為與之并列的一 類。研究細(xì)胞的學(xué)科稱為細(xì)胞生物學(xué)。細(xì)胞體形極微，在顯微鏡下始能窺見，形狀多種多樣。主要由細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成，表面有細(xì)胞膜。高等植物細(xì)胞膜外有細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)中常有質(zhì)體，體內(nèi)有

葉綠體和液泡，還有線粒體。動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁,細(xì)胞質(zhì)中常有中心體，而高等植物細(xì)胞中則無。細(xì)胞有運(yùn)動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)和繁殖等機(jī)能。

細(xì)胞特性:

1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常胃組織。

2)細(xì)胞鑒定：廣譜（PCK）或細(xì)胞-19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

3)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

4)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

產(chǎn)品規(guī)格：>5×105細(xì)胞數(shù)

包裝規(guī)格：1ml凍存細(xì)胞懸液或T-25培養(yǎng)瓶

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細(xì)胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2)T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

友情提示注意以下幾點(diǎn)：

1、收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清

2、貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)

3、如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室

 深圳瑞清生物信息科技有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、經(jīng)營(yíng)為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司具有完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開發(fā)平臺(tái)，成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng)，熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù)，結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，可以有效的保證公司產(chǎn)品強(qiáng)的穩(wěn)定性和高的準(zhǔn)確性，同時(shí)又具有競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格。 公司主營(yíng)ELISA試劑盒，目前可以提供生化試劑、分子生物學(xué)試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學(xué)試劑盒、實(shí)驗(yàn)耗材等多門類上萬種產(chǎn)品，產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。