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人真皮毛乳頭細胞

人真皮毛乳頭細胞
我司品種齊全,可以為細胞培養(yǎng)上清夜,血清,血漿,尿液,組織液,心房水,體液標本等等。對每一位客戶追蹤服務,因材施教,對產(chǎn)品不僅售前負責,售后更負責。
我司竭誠為廣大科研用戶提供全面,優(yōu)質,價格優(yōu)勢的產(chǎn)品,免費為您提供全程技術指導,解決您的后顧之憂。提供產(chǎn)品訂制包裝,免費快遞送貨上門,質量保證。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質:生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2023-10-26
  • 訪  問  量:1024
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聯(lián)系電話:0755-28019324

產(chǎn)品詳情
品牌其他品牌貨號RQ-Y20157
規(guī)格供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研試驗

人真皮毛乳頭細胞

我司產(chǎn)品齊全,因上架數(shù)量有限,未能全部上架,如需訂購或者產(chǎn)品詳情請直接聯(lián)系我司銷售!

細胞培養(yǎng)步驟

1) 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1. 準備 McCOY's 5A 培養(yǎng)基(McCOY's 5A,SIGMA,貨號 M4892,添加 NaHC03 2.2g/L),90%;you質胎牛血清,10%。

2. 培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3. 凍存液:90%培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

2) 細胞處理:

復蘇細胞:將含有 lmL 細胞懸液的凍存管在 37°C 水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4分鐘,棄去上清液,補 加 l-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 l〇cm皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。隔天換液并檢查細胞密度。

細胞凍存:

待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法步驟進行, 重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,加 DMSO 至最終濃度為10%。加入 DMSO 后迅速混勻,按每 lml 的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于 1X106個細胞凍存。

細胞接受后的處理:

1. 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2. 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將 T25瓶置于 37°C 培養(yǎng)約 2-3h〇

3. 棄去 T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml 本公司附帶的培養(yǎng)基。

4. 如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用 6ml 本公司附帶的培養(yǎng)基。

5. 接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們取得聯(lián)系。

人真皮毛乳頭細胞

培養(yǎng)方法:

收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況:

如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細胞已長滿(達80-90%)。即可進行傳代,具體步驟如下:

a,棄去培養(yǎng)液,用PBS洗1-2次。

b,向瓶內加入1.0-2.0ml酶液,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取酶,加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液,輕輕吹打細胞。

c,加入等量的的培養(yǎng)液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)

d,傳代比例:1:2-1:3

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心 5分鐘,棄去上清液,補加 l-2mL 培養(yǎng)液后吹句,將細胞懸液按 1: 2到 1: 5的比例分到新的含 8ml 培 養(yǎng)基的 新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細 胞懸 液按 1: 2到 1: 3的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點:

1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。

5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。

6)天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

友情提示注意以下幾點:

1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清

2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化,請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到隔天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)

3、如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室

細胞用途:僅供科研使用。






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