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大分子抗原因其具有兩個(gè)以上的抗原決定簇，而可用雙抗體夾心法測(cè)定，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3，T4及睪酮等激素因其只有一個(gè)抗原決定簇，從而無法使用雙抗夾心方法測(cè)定，只能采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法測(cè)定。具體步驟如下：1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。2．同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)的小分子，溫育一定時(shí)間后洗板；此步中，待測(cè)樣本的小分子將與酶標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上特異抗體結(jié)合。3．加入酶底物，溫育顯色測(cè)定，顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)樣本中的小分子含量成反比。這種測(cè)定模式...

ELISA測(cè)定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽性和假陰性率低。在陽性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)"。“灰區(qū)"的大小可用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定。測(cè)定結(jié)果處于“灰區(qū)"的樣本,可通過確認(rèn)試驗(yàn)或追蹤檢測(cè)來確定到底是陽性還是陰性ELISA“灰區(qū)"是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念?；覅^(qū)的設(shè)置有二種:(1)CO×(1±C),C為該試劑的批內(nèi)C(一般在15%～2...

每一盒ELISA試劑盒里面都有一份對(duì)應(yīng)的說明書，而每一份說明書里都會(huì)有寫樣本和稀釋液的稀釋比例，為什么樣本都需要稀釋呢?今天的文章中，將為您分析：為何ELISA實(shí)驗(yàn)血清樣本都需要稀釋?在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)血清為什么要稀釋？有兩個(gè)原因：1）競(jìng)爭(zhēng)抑制比較明顯，應(yīng)稀釋競(jìng)爭(zhēng)物；2）以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，當(dāng)然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關(guān)系也不大。不管你是用直接競(jìng)爭(zhēng)還是...

在ELISA試劑盒中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。...

熒光定量PCR試劑盒的操作步驟：1、取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其溶解。2、兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。3、RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10...

在ELISA試劑盒中通常有三次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶聯(lián)絡(luò)物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，散布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振動(dòng)。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只需待血清天然凝聚、縮短后即可取得。ELISA試劑盒也可在板孔中參與稀釋液，然后在微型轟動(dòng)器上轟動(dòng)1分鐘以bao證混和。通常說來，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超越一星期測(cè)定的需低溫冰存。可用作ELISA試劑盒測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾...

大分子抗原因其具有兩個(gè)以上的抗原決定簇，而可用雙抗體夾心法測(cè)定，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3，T4及睪酮等激素因其只有一個(gè)抗原決定簇，從而無法使用雙抗夾心方法測(cè)定，只能采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法測(cè)定。具體步驟如下：1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。2．同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)的小分子，溫育一定時(shí)間后洗板；此步中，待測(cè)樣本的小分子將與酶標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上特異抗體結(jié)合。3．加入酶底物，溫育顯色測(cè)定，顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)樣本中的小分子含量成反比。這種測(cè)定模式...

在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。ELISA試劑盒屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如...

酶免試劑盒及酶聯(lián)免疫試劑盒，酶免試劑盒在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)相當(dāng)普及，絕大部分的酶聯(lián)免疫試劑盒都是用來檢測(cè)未知樣本中抗原的濃度。今天深圳瑞清生物就與大家共享一些關(guān)于選購(gòu)酶免試劑盒五步曲，助力您的科研實(shí)驗(yàn)！希望能幫助到您！選購(gòu)酶免試劑盒五步曲：第yi步、明確檢測(cè)何種蛋白。第二步、明確編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性合適。第三步、尋找檢測(cè)這些物種蛋白的試劑盒。第四步、咨詢商家酶聯(lián)免疫試劑盒使用的抗體類型：多抗還是單抗？單抗是針對(duì)什么抗原決定簇的。第五步、做出自己的判斷該買哪個(gè)試劑盒。深...

細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長(zhǎng)的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染，常見的污染源有：1.細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見...